Actinobacillus pleuropneumoniae. Características y cultivo

             Actinobacillus pleuropneumoniae. Características y cultivo

                                                                                              Carlos Rodríguez G   20014

El  Actinobacillus pleuropneumoniae, es el agente etiológico de la Pleuroneumonía Porcina  involucrado directamente con el complejo respiratorio porcino, su distribución es mundial y ha adquirido mayor importancia desde la década de los 80 del siglo pasado.

Se presenta de forma aguda, produciendo mortalidad y en su forma crónica un retraso en el crecimiento o en el engorde.

Etiología, el agente causal es Actinobacillus pleuropneumoniae un microorganismo gram negativo  hemolítico, cuando se cultiva en agar sangre, forma cocoidal con una cápsula de Lipopolisacárido, muy similar a la de otras bacterias gram negativas, pero con cacacterísticas antigénicas por si misma, su único huesped es el cerdo y las cepas aisladas varían en virulencia y patogenicidad.

Actinobacillus pleuropneumoniae (A.p) se cultiva fácilmente en agar sangre, necesitando de la Nicotinamida Adenina Dinucleótido NAD para su crecimiento, hay reportes que muestran cepas que no lo necesitan, pero en un aislamiento de laboratorio el cultivo se hace preferentemente en Agar s Sangre y el NAD lo proporciona un cultivo de Stapphilococcus epidermidis, que se obtiene  fácilmente de la piel.

Para hacer la siembra, debemos disponer en primer lugar, muestras de animales recién sacrificados en su forma aguda, las lesiones son muy características, muestran un área hepatizada en el pulmón, que contiene  exudado seroso .

Lesiones en un pulmón

Para un aislamiento, usamos una espátula de laboratorio, que se calienta al rojo en un mechero de Bunsen  se cauteriza la superficie de la lesión, en seguida se utiliza una jeringa de 10 ml. Con aguja número 18 se indroduce en la lesión y se succiona, el líquido obtenido se siembra en agar sangre y cuando se ha secado se agrega una tira  de Staphilococcus (Nodriza), se incuba colocando las cajas Petri, en un frasco de boca ancha que tiene una vela encendida, al cerrar el frasco el fuego de la vela consume el Oxígeno del frasco  el cultivo se hace con una baja tensión de Oxígeno.por 18 horas de incubación.

Mostrando unas colonias pequeñas, que crecen abundantemente cerca de la Nodriza, si realizamos la siembra en Agar Infusión de Corazón y Cerebro, suplementado con suero, las colonias muestran una iridiscencia muy notoria debida a la cápsula de la bacteria, los tonos van del azul claro al verde.

Si tomamos unas colonias con una  tira recta de platino, se pueden inocular embriones de 5 días de incubación,el cultivo mata al embrión en 18 horas de incubación.

El líquido del saco vitelino cosechado nos da muy altos títulos.

Se pùede cultivar en medios líquidos.

Un cultivo puede hacerse en grandes cantidades usando :

Primagen                                             22 gramos  

Difosfato de Sodio                                2.5 g
Dextrosa                                               2.5  g
Cloruro de Sodio                                  5.0  g
Agua  destilada   c.b.p.                        1000 ml.                

Este medio se ajusta a un pH de 7.2

Se esteriliza en autoclave, 15 libras de presión por 20 minutos.

Para sembrar este medio es necesario agregar suero de cerdo, conviene aclarar que el plasma sanguíneo, es un líquido que se obtiene  de la sangre de los cerdos después de haber añadido un anticoagulante y de eliminar los componentes celulares. El suero sanguíneo es el líquido obtenido de la  sangre sin  adición  de anticoagulante, una vez eliminada la fibrina y los componentes celulares.

El suero se inactiva a 56 grados centígrados por 30 minutos, se enfría hasta los 5 grados y se centrifuga en una centrífuga Westfalia, obteniendo un líquido de color semejante al vino tinto, el líquido se “pule” en un filtro prensa hasta que esté bien cristalino, en seguida se pasa por una serie de filtros siendo el último una cápsula esterilizada de una membrana 0.22 micras.(Sartorius)

El suero filtrado se somete a pruebas de esterilidad por 24 horas.

El NAD (B-Nicotinamide adenine dinucleotido Disodium salt N 6005.SIGMA CHEMICAL COMPANY).Viene  en polvo, se diluye en agua bidestilada y se filtra por una membrana .22 para esterilizarlo, también se toma una muestra para comprobar la esterilización.

Los cultivos positivos se someten a pruebas de aglutinación, los serotipos y sus caracteristicas están ampliamente publicados en otros artículos,  

Para un diagnóstico rápido en casos de infección aguda y alta mortalidad existen pruebas  ELISA.
Si se desea hacer un cultivo en grandes volúmenes, se utiliza un Bio-reactor a 600 revoluciones por minuto, por 20 horas a 37 grados centiígrados.

Referencias::
Experiencias del Autor. carlosrodriguezg25@gmail.com
Proceedins of the HAP International Conference México 1996

El autor es Médico Veterinario Zootecnista por la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autónoma de México, una maestría incompleta en Microbiología Industrial por la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Autónoma de Nuevo León. Ex miembro de The American Association Of Avian Pathologists y miembro de la Asociación Mexicana de Microbiología, Bioingeniería y Biotecnología. Mexico D.F.
Actualmente en retiro
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