CONTROL DE CALIDAD PARA LA BACTERINA CORIZA AVIAR

            CONTROL DE CALIDAD PARA LA BACTERINA CORIZA AVIAR

    

              Carlos Rodríguez G.   Laboratorios Biofarma       Noviembre de 2012

Las pruebas de control de calidad para la bacterina de Coriza, son muy similares si es de cultivo en embrión de pollo como en caldo de cultivo y son de carácter obligatorio para cada lote.

Titulación

1.-Se toma una muestra del cultivo 10 ml son suficientes. Se siembra en agar sangre, cruzar la siembra con la Nodriza. Incubamos por 24 horas.

2.- Al mismo tiempo, procedemos a hacer una titulación, tomamos una serie de tubos 6 en total que contengan Caldo Infusión de Corazón y  Cerebro cada tubo conteniendo 4.5 ml.

3.-Tomamos una muestra del cultivo por titular 0.5 ml y lo agregamos al primer tubo, con otra pipeta diferente mezclamos todo el contenido del tubo, por 5 veces.

4.-Ya tenemos la primera dilución 1 en 10 y a si continuamos con los tubos restantes , hasta que al final desechamos 0.5 ml. consiguiendo la dilución de10-1 a 10-6.

NEFELÓMETRO

5.-Usando otra pipeta empezamos con la dilución más alta, para esto previamente  cuadriculamos con un marcador de tinta por el reverso una caja petri  que contenga agar sangre, las cuadrículas deben ser desde la dilución 10-6 a 10-3.

6.-Colocamos con una jeringa de tuberculina 0.01ml por cuadro empezando por la dilución más alta a la mas baja 10-3 y desechando 0.5 al final.

Dejamos la caja de agar, el tiempo suficiente para que las gotas se sequen, e inmediatamente después usando una asa de platino, tomamos la cantidad suficiente de Nodriza para hacer una cuadricula sobre el agar

7.-Incubamos por 24 horas

8.- A las 24 horas contamos las colonias de cada cuadro empezando por 10-6, esto se puede hacer a simple vista o con un cuenta colonias, se suman las colonias y se saca un promedio, ese número de colonias representa el titulo en la dilución 10-6 por 0.01ml, pero como debemos dar el título por ml. se recorre hasta la dilución 10.8 por ml.

9.- Es recomendable hacer esta prueba por duplicado para evitar algún error

Existe un método de titulación que nos permite saber al instante la cantidad de microorganismos por ml. Y es muy usado durante la vigilancia del crecimiento en nuestro reactor, cuando estamos produciendo el cultivo en caldo, no es exacto pero si nos da una idea aproximada de la titulación.

TITULACION

El Nefelómetro de Macfarland consiste en una serie de tubos con una turbidez, que nos muestra una concentración de mayor a menor cantidad.La técnica para fabricar un Nefelómetro viene ampliamente explicada en Clinical Diagnosis by Laboratory Metods por Todd, Sanford y Wells pp.895-96.  no la explico en éste artículo para no desviarnos del tema.

Este método comparativo nos permite saber en que momento llegamos a la curva de máximo crecimiento y es muy recomendable por su simplicidad y por su resultado

La siembra directa que se hace en agar sangre debe ser un cultivo puro, se compara con una siembra en agar infusión de corazón y cerebro AICC que debe salir negativa.

Cuando la bacterina esta inactivada hacemos una prueba de inocuidad, sembrando en AICC y en agar verde brillante,

Resultado: Después de un periodo de incubación por 48 horas, los cultivos deben ser negativos.

11.- Se inocula 0.1 ml a 5 embriones de entre 10 a11 días de incubación durante 3 días,  en seguida hacemos una prueba de hemoaglutinación y observamos si algún embrión no esta retrasado de tamaño o en forma de U muy cerrada, con esto descartamos si hay alguna contaminación por virus de Newcastle, Influenza o Bronquitis

12,.Hacemos una prueba de potencia, vacunando vía subcutánea un ml. de bacterina a 10 pollos de mas de 7 semanas.

13.-Un número similar de pollos sirven como grupo control y no se vacunan, ambos deben estar bien aislados y separados uno de otro.

14.- Se aplica una gota de un cultivo puro que contenga un título de 10-8 a todos los pollos de la prueba, vacunados y no vacunados.

15.- A las 48 horas se observan los senos nasales y se busca si existe algún estertor traquobronquial tanto en pollos vacunados o no.

16.- El resultado será efectivo si todos los pollos vacunados siguen normales y los no vacunados muestran inflamación en uno o ambos senos nasales, estornudo, secreción mucosa y baja de consumo de alimento.

17.- Se hace una aislamiento de los pollos con inflamación de senos nasales, debe ser positivo para ­­­ Avibacterium paragallinarum

18.- La bacterina debe dar un 100% de protección, el periodo de protección es proporcional al adyuvante empleado en el producto terminado

Bibliografia

1.- Isolation and Identification of Avian Pathogens por el comité editorial de American Association of Avian Pathogens

2.-Clinical Diagnosis By Laboratory Metods. Todd, Sanford. Wells

TÉCNICA DE POSITIVADO A LA GOMA BICROMATADA

                                 LA GOMA BICROMATADA
                    Carlos Rodríguez G.                               2012

La goma bicromatada, la cianotipia y otras técnicas de positivado fotográfico,son técnicas, que no usan las sales de plata y tuvieron mucho éxito por su belleza y el encanto de la fotografía analógica, que empezaba a surgir, en los albores del siglo XIX, ese tipo de fotografía también logró presentar obras de gran belleza, que ahora se consideran como obras de arte,
Mi trabajo, como el de todos los seguidores de ésta técnica hacen un modesto reconocimiento a los pioneros de la fotografía, que experimentaron siempre de manera empírica, para el desarrollo de la técnica fotográfica, que sin ella en nuestros tiempos sería difícil imaginarnos, porque la fotografía, no solamente guarda los rostros de nuestras familias.Tiene un gran número de usos industriales y científicos y fue la base del cinematógrafo
El positivado a la goma bicromatada consiste en copiar por contacto un negativo  ampliado o un negativo sobre una hoja de acrílico que generalmente se ordena en un establecimiento de copias y planos, ésta es la forma más sencilla para tener un “negativo”, el positivado lo hacemos sobre una hoja de papel para acuarelas, que se consigue en las grandes papelerías. El papel de buena calidad, que previamente ha sido preparado a base de extender en una de sus caras una emulsión, compuesta por goma arábiga, bicromato de potasio y un pigmento o colorante insoluble al agua . A continuación la hoja de papel sensibilizada, se pone a secar, y de esta forma se hace sensible a la luz. Una vez ya seca la hoja de papel, se pone en contacto con el negativo (emulsión contra emulsión) y se expone a una  luz  blanca. Así queda impresionada una imagen latente del negativo (será un positivo). Para revelar, basta sumergir la hoja de papel en una cubeta con agua, dejándola reposar hasta que la imagen empiece a aparecer. Cuando la goma arábiga entra en contacto con el agua, se produce un fenómeno de inhibición o hinchamiento sobre la misma. Esta reacción se puede detener o reducir cuando a la goma se le agrega bicromato y se expone a la luz, es decir, la goma arábiga se hace sensible a la luz si se le adiciona bicromato. A esta mezcla se le incorpora un pigmento o colorante insoluble al agua para que la imagen adquiera un color. El procedimiento de revelado se produce de la siguiente manera; las partes transparentes del negativo se insolubilizan, ya que la luz ha llegado más directamente sobre la emulsión, quedando éstas exentas del fenómeno de la inhibición y, por tanto, fijadas en el papel. Por el contrario. las partes oscuras del negativo, al no traspasar la luz por ellas, experimentarán la inhibición cuando se pongan en contacto con el agua y se hincharán después de permanecer un rato sumergidas en la misma. De esta manera es como se produce el positivado a la goma bicromatada. El que estas reacciones se produzcan de forma correcta es fundamental para obtener resultados satisfactorios.




La forma más sencilla, para colorear, es usar colores no solubles en agua, Para realizar este proceso es necesario lo siguiente: 
1º) Se puede utilizar cualquier papel que sea resistente al agua. pero se recomienda el papel acuarela de la mejor calidad.
2º) En cuanto a los pigmentos. Estos deben ser insolubles al agua, de lo contrario los blancos quedarían teñidos.  Se pueden utilizar varios colores y negativos en una misma imagen. Para ello habrá que extender capas sucesivas de emulsión y repetir los pasos de exposición y revelado para cada color que se aplique, es decir, se extenderá cada capa, se dejará secar, se expondrá, se revelará y se secará de nuevo, antes de extender la siguiente capa.
La intensidad de los tonos dependerá de las proporciones que se añadan de los mismos, teniendo en cuenta que de los colores oscuros se deberá agregar menos cantidad que de los claros. Esto dependerá del gusto de cada experimentador.
3º) En cuanto a la emulsión, se precisarán los siguientes productos: 
-Solución de goma arábiga diluida en agua al 40%. La goma deberá estar en estado sólido antes de diluirse en el agua. 
-Solución de bicromato de potasio diluido en agua al 10%. El bicromato deberá ser químicamente puro. 
-Fenol, el cual es un conservador para la goma arábiga. 
4º) En cuanto a útiles necesarios: 
- Un tablero o soporte rígido para colocar encima el papel y proceder a su preparación. . 
- Dos brochas de pelo fino y 6 cms. de ancho para la extensión de la mezcla, una para untar y el otra para retocar. 
-Un recipiente para guardar la mezcla, preferentemente que no sea de cristal. 
- Una probeta graduada para poder medir las cantidades de los productos.
-Una báscula de laboratorio 
- Una prensa de contacto, también puede servir un cristal que cubra las dimensiones de la copia.
 Una tela de rejilla para proceder a la dilución de la goma arábiga.
El positivado se realiza directamente al Sol en un día exento de nubes.

PREPARACIÓN DE LA GOMA ARÁBIGA 
 La goma deberá prepararse siguiendo las proporciones que a continuación se citan: 
Goma Arábiga.................................400 gramos 
Agua.................................................600  mililitros
Fenol................................................   1 gramo (como preservativo)
 La goma se disuelve en la cantidad de agua señalada y de las siguiente forma: 
Colóquese la goma dentro de una tela de rejilla o sea un colador y sumérjase ésta en un tarro en el que se hallará la cantidad de agua prescrita. El tarro debe de cerrarse perfectamente. Una vez se haya disuelto un poco la goma deberá añadirse el fenol. Acto seguido vuélvase a cerrar el tarro. Se recomienda preparar la goma unos días antes de su utilización, puesto que su dilución es muy lenta. Cuanto mas vieja sea la goma mejor resultado dará.
PREPARACIÓN DEL BICROMATO DR POTASIO 
El bicromato deberá prepararse según las cantidades que continuación se citan: 
Bicromato de Potasio ........... 10 gramos 
Agua....................................    100 ml
Disuélvase bien y guárdese en un frasco bien tapado.
PREPARACIÓN DEL PAPEL 
Antes de emulsionar el papel, primeramente se ha de sumergir en agua caliente a unos 60º C aproximadamente, durante 15 minutos. De esta forma se evitará que el papel se encoja o salgan deformaciones posteriores al revelarse. Después se pondrá a secar en ausencia de luz. Seguidamente se aplicará una capa de almidón muy fina y leve, para evitar que el tinte penetre en la fibra del papel, pero ¡cuidado!, no almidonar en exceso pues ello dificultaría la fijación de la capa sensible en el papel. El almidón se halla en polvo y se diluye en agua para su aplicación.
PREPARACIÓN DE LA EMULSIÓN 
Una vez preparadas la goma y el bicromato se mezclan en partes iguales, por ejemplo y para empezar, serán suficientes unos 5 cc de cada compuesto para emulsionar una hoja de papel de 30x40  cms. Una vez mezclada la goma con el bicromato, se agregará una parte de pigmento por cada 3 partes de solución preparada. hasta la total dilución del pigmento, Este apartado es sumamente importante. Cuando esté preparada ya la emulsión se extenderá sobre el papel, el cual estará ya preparado como se ha mencionado anteriormente. La brocha se mojará en la emulsión y se extenderá sobre el papel en todas direcciones hasta que adquiera una completa homogeneidad. Se evitarán las bolsas de aire, los grumos, polvo y otras imperfecciones e irregularidades que puedan producir defectos sobre la superficie del papel. Seguidamente se pasará otra brocha seca para igualar las pinceladas dadas anteriormente. Toda esta operación a la luz del día. Acto seguido la hoja de papel se pondrá a secar en un cuarto oscuro, puesto que la emulsión se hace sensible al secarse.
EL POSITIVADO PASO A PASO 
Deberá realizarse bajo la luz de seguridad (Roja). Una vez seco el  papel ya estará a punto para ser positivado. 
1º) Se colocará el papel sobre un prensa de contacto o sobre un soporte rígido. La emulsión deberá estar cara arriba. 
2º) Se pondrá encima del papel negativo elegido (emulsión contra emulsión). El negativo deberá tener un buen contraste. 
3º) Se cerrará la prensa o se colocará un cristal sobre los mismos. Procúrese que todo quede bien prensado. 
4º) Se expondrá a la luz directa del Sol por un tiempo que puede ser de unos 10 minutos a media hora, el tiempo se conseguirá haciendo pruebas
 El tiempo de exposición variará considerablemente según la hora del día, el espesor de la emulsión y, naturalmente, de la densidad del negativo. Procure que la luz caiga verticalmente sobre el papel,.
EL REVELADO DE LA COPIA 
 Una vez dada la exposición se puede revelar a la luz de la habitación
Para procesar la copia se sumergirá ésta en una cubeta con agua normal a una temperatura de 20- 25º C. dejándola así hasta su completo revelado. Deberá cuidarse que la copia quede completamente sumergida. El tiempo de revelado variará mucho; por ejemplo, de unos minutos hasta incluso horas. No se deberá agitar la copia ni tocarla mientras esté sumergida, pues la emulsión podría rasgarse mientras esté mojada. Cuando haya aparecido la imagen y hallado el grado de contraste deseado se sacará y se colgará hasta su total secado. 
Así, se dispondrá ya de una obra de arte, cuyo grado artístico habrá sido manejado totalmente por uno mismo. La gran belleza de esa imagen  compensará todo el esfuerzo y tiempo que haya podido invertir. Si los resultados no son, desgraciadamente, buenos, no hay que desesperarse, recapacita, piensa en un posible error, y procede de nuevo desde el comienzo.
BIBLIOGRAFÍA.
Enciclopedia de la fotografía, por Kodak
Blog de Jorge Lidiano


El autor, presentó una exposición colectiva en el museo de la antigua estación de ferrocarril en la avenida Colón Monterrey N.L.  en el año 2000

                                               

Avibacterium paragallinarum FEATURES AND CULTURE

          Avibacterium paragallibarum  FEATURES AND BACTERIOLOGICAL CULTURE

    

             Carlos Rodríguez G      Biofarma Laboratories  (carlosrodriguezg25@gmail.com)    

Formerly known as Haemophilus gallinarum, Haemophilus paragallinarum and now Avibacterium paragallinarum Ap  is a gram negative bacteria, grows well in the egg yolk sac of embryos incubated at 5 or 6 days.

For culture need a broth containing at least 20% meat peptones, 5% meat extract, 5% dextrosa,. 5% sodium chloride and 2.5% sodium diphosphate, the culture also requires chicken serum 5% and an enzyme, nicotinamide adenine dinucle on reduced form DPN 5micrograms per ml of broth,.

As shown is a special medium that is not in the market and have to design.

Furthermore our culture must be done in a temperature reactor 37 degrees Celsius and maintains  at less 600 revolutions per minute RPM.

It should look a lot for bacterin production, but if it is isolated for the first time can be done in agar blood and Staphylococcus epidermidis, as mothership, the DPN enzyme excreted Staphylococcus colonies  is closest to the mothership, are larger, they are all as fine droplets of water this phenomenon we call satellitism and is very characteristic of the bacteria, in crops used instead of blood agar, brain heart infusion with chicken serum at 10% in these cases observed through a light source  you can see iridescence phenomenon, magenta toned

The isolates from the sinuses, are achieved in a cut in the form of a small triangle, find a clear and abundant mucus obtained a swab and is planted in the agar when the mothership placed dry, well seeded agar incubated in a wide mouth jar with a candle which burns to close the bottle depletes the oxygen content is thus achieved the crop to grow with a low amount oxygen, the cultures were obtained in less than 24 hours and are representative of a positive diagnosis of Avian Coryza.

Not just any insulation can make a bacterin. Making a bacterin effectively requires all three serotypes include A, B and C. The handling of these serotypes and conservation can explain it with an appendix scheme of how to treat each serotype to always have the same standard antigenicity.

As for my experience in growing Actinobacillus paragallinarum (Haemophilus paragallinarum), tests were made ​​with different means brand and did not find any effective and low price, I have used for over 20 years the following formula:

Primagen     20.0 g .. tissue culture medium

Meat extract            5.0 g. Difco

Sodium chloride       5.0 g.

Sodium diphosphate. 2.5 g
Dextrosa                   2.5 g.

1000 ml double distilled water.

This medium should be adjusted to a pH of 7.2

Sterilize at 120 degrees Celsius, a kilo of pressure for 20 minutes.

The chicken serum and beta Nicotinamida Dinuclotido salt disódica  a reduced form (NADP, coenzyme II) N 605 Sigma Chemical Co. sterilized by filtration sterility testing are made ​​and used as quickly as possible because it has enzymes reducing inhibitory potency.

Serum and NAD are added to the culture broth under safe sterility and if grown in a fermenter. Should be no more than 600 rpm, the culture has a generation time of 18 minutes

To get the chicken serum is purchased on the trail of  birds, 20 30 liters of  blood,  is placed in a colander made ​​expressly to filter clots and left for 24 hours at a temperature of 5 degrees Celsius (cold room).

The filtrate clarity fic to spin in a centrifuge made ​​for this purpose have baskets for a 500 ml bottle. for 30 minutes, then passed through a filter press cloth containing Pellyon and Decalite  (filter media), after two or three passes serum should be clear and bright with red wine-like appearance.

Forr serum sterilized, filtered by a 0.4 micron cartridge at 0.2, and then rated by a membrane filter of 0.4 and 0.2 microns in series, all Sartorius brand. Filters that get sterilized and ready for use.

There are other brands, but after several validation tests, the Sartorius brand proved to be the safest in terms of quality control.

If you do not have the Primagen peptone and meat extract, you can buy in a butcher Heart ground beef and ground beef.

200 grams of heart beef and per lt. 50 grams of ground beef, left in  1 lt. distilled water for 24 hours to make an infusion, at 24 hours boil for 20 minutes and stored in a freezer at 5 degrees Celsius for 18 hours.

After that time, the stock will have a thick layer of bait, which is removed, filtered with a blanket, and the filtrate is passed to a filter press, until the broth clear and bright like the beer.

The broth can be frozen or used immediately.

For use as a culture medium should add Sodium Chloride and diphosphate, adjusting the pH to 7.2, autoclaved,  20 kg. pressure, 20 minutes. 

    PRINCIPLES OF TRANSFORMATION 
      In Avibacterium paragallinarum (A-p)         

                                    

When still unknown intelligent molecule, which is how some geneticists call to ADN before 1928 many experiments were made ​​to kow the material that made ​​the cells replicate and inherit the characteristics of their progenitor, on this time Frederick Griffith used the information that some pneumococcal strains could mutate smooth to rough and back and made ​​a series of experiments with virulent and avirulent pneumococci.

He inoculated virulent type III pneumococci heat-killed a group of mice. Applied to another group type II pneumococci avirulent and a third group with  the two.pneumococci avirulent and virulent

The result was that the first two groups did not get sick, in the mice and the third group, killing all, showing that the genetic material of pneumococci had spent living dead type III to type II, the latter phenomenon was known first as Griffith effect and later Transformation.

There were other researchers who perfected these experiments by combining rough pneumococcal cells type II, type III smooth cells. These experiments demonstrated the passage of genetic material of living cells to the dead, this phenomenon is not exclusive of pneumococci are now known to occur between different bacteria,  Haemphilus, Pasteurella, Bacillus subtilis, Shigella etc.

So that taking advantage Avibacterium and Pasterella and have certain common characteristics, it’s  possible to get Avibacterium strain that not need the DPN and serum veside to retain their antigenicity and their pathogenicity, without having a Sequencer or other modern  genetic equipment .The important thing is to arm ourselves with a lot of patience and work hard to find what we seek.

We we’ll get for example, a vaccine of Pasteurella, CU strain, subject it to heat, checking that has been inactive or dead gives the mix a  one Avibacterium serotype.,  put in a medium such as agar Heart Infusion Brain and  without Serum and DPN, may be the poisibility that in no one culture tubes find a colonies, but if we're lucky we can find some colonies across the petri dish culture. Now comes the job of taking each colony and suspend it in a tube containing Infusion Brain, Heart broth media, the tubes that showing growth must be taken separately and inoculate 5 chicks six weeks old, it’s possible  in one culture find lesions coryza avian isolate of these are again Avibacterium, now we can test the patogenicity and antigenicity of the serotipe you work.

References

Principles of Genetics, Jhon Wiley 1988

Isolation And Identification Of Avian Pathogens Editorial commitee for The American Association of Avian Pathologist Texas A & University College Station

The Production And Use Of  Newcastle Disease Vaccines. W.H. Allan, J.E Lancaster and B. Tóth

Food and Agriculture Organization Of The United Nations FAO
Patrick J. Blackall  Personal comunication
MV. Carlos Rodríguez G. Labs. Biofarma, Personal Investigation

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QUALITY CONTROL FOR AVIAN CORYZA BACTERIN

            QUALITY CONTROL FOR AVIAN CORYZA BACTERIN

    

            Carlos Rodríguez G.   Biofarma  Laboratories  (carlosrodriguezg25@gmail.com) 2013

The quality control tests for Coryza bacterin are very similar if the chick embryo culture and broth propagated and are mandatory for each lot.

Titration

1.-A sample of 10 ml is sufficient crop. It is sown in blood agar, cross seeding with Staphilococcus epidermidis.(Mothership) Incubate for 24 hours.

2. - At the same time, proceed to do a titration, took a series of tubes containing 6 broth of Brain Heart Infusion each tube containing 4.5 ml.

3.-Take a sample of 0.5 ml per head and add it to the first tube, mixed with another different pipette entire contents of the tube for 5 times.

4.-We have the first dilution of 1 in 10 and if we continue with the remaining tubes, until finally discard 0.5 ml. we are diluting 10-1 to 10-6.

5.-Using another pipette start with the highest dilution for this previously frame with marker ink on the back a Petri containing blood agar, grids must be from the dilution 10-6 to 10-3.

6.-We placed a tuberculin syringe with 0. 0 1ml per frame starting with the highest dilution to 10-3 and discarding lowest end 0.5.

 left the petri culture, long enough to allow the drops to dry, and immediately after using a platinum loop, take the Mothership enough to make a grid on the agar

7.-incubate for 24 hours

TITULACIÓN

8. - At 24 hours there are colonies of each frame starting 10-6, this can be done with the naked eye or with an account colonies, colonies are added and removed an average, the number of colonies represents your titration in 10-6 for 0 0 1 ml, but as we give the title by 1ml,. runs until dilution is 10.8 ml.

9. - It is advisable to do this test in duplicate to avoid an error

There is a titration method that allows us to instantly know the number of organisms per ml. And it is used for monitoring the growth in our reactor, when we are producing the broth culture, it is not accurate but give us a rough idea of the titration

MacFarland Nephelometer consists of a series of tubes with a turbidity, which shows a greater concentration to less concentration.The technique for manufacturing a Nephelometer  comes widely explained on Clinical Diagnosis by Laboratory Metods by Todd, Sanford and Wells pp. 892-96. not explained in this article.

NEFELÓMETRO DE MACFARLAND

This comparative method lets us know that when we reach the maximum growth curve and is highly recommended for its simplicity and its result 

10.-Direct sowing was done on blood agar must be a pure culture, compared to a seed agar and brain heart infusion should leave negative AICC.

Inactivated bacterin When this test is safety, seeding AICC and brilliant green agar,

Result: After an incubation period of 48 hours, cultures must be negative.

11. - 0.1 ml is inoculated to 5 embryos from 10 days of incubation for 3 days, then make a hemagglutination test and observe if a retarded embryo size is not U-shaped or very closed, with this rule if there is some contamination newcastle virus, influenza or bronchitis

12. We do a power test, one ml subcutaneously vaccinated. bacterin to 10 chickens over 7 weeks old.

13.-A similar number of chickens served as controls and not vaccinated, both should be well insulated and separated from each other.

14. - Apply a eye drop of a pure culture containing a titre off 10-8  to all  chickens, vacunated and unvaccinated.

15. - At 48 hours sinuses are observed and if there is a rattling looking  both chickens vaccinated or not.

16. - The result will be effective if all are normal chickens vaccinated and unvaccinated show one inflammation or both sinuses, sneezing mucus and low feed intake.

17. – Make a culture of chickens with swollen sinuses, should be positive for ­­­ Avibacterium paragallinarum

18. - The bacterin should give a 100% protection, the protection period is proportional to the adjuvant used in the finished product,

References

1.-Isolation and Identification of Avian  Pathogens. Editorial Committee for The American Association of Avian Pathologists
2.-Clinical Diagnosis by Laboratory Metods Todd, Sanford and Wells
3.-Carlos Rodriguez G Personal experience

VACUNAS BACTERIANAS PARA EL CONTROL DE LA CORIZA AVIAR

               VACUNAS BACTERIANAS PARA EL CONTROL DE LA CORIZA AVIAR

                             Carlos Rodríguez G.   (carlosrodriguezg25@gmail.com)     Laboratorios Biofarma

                                                                                                     

                                                                                                 Noviembre de 2012

Las vacunas bacterianas en Veterinaria se denominan comúnmente  Bacterinas, esto viene siendo, una suspensión de bacterias inactivadas químicamente y que pueden llevar un adyuvante para potenciar su efecto.

Mi experiencia en la producción de bacterinas para el control de la Coriza, comprende más de 40 años, recolectando cultivos de casi todo el país. En un principio y por varios años, la bacterina se producía en cultivos de embrión de pollo de 5 a 6 días de incubación y se inactivaba con formaldehido.

Los pasos para la producción de una bacterina cultivada en embrión de pollo son los siguientes.

1.-Aislamiento de la bacteria, en Agar Sangre, el cultivo se le agrega  Staphilococcus epidermidis, los detalles del aislamiento y necesidades del cultivo, no son materia de éste árticulo y se explicarán en otro apartado.

2.-El cultivo presenta el fenómeno de satelitismo, es decir, las colomias de Avibacterium crecen en la parte cercana a la tira de Staphilococcus y su tamaño es mayor a medida que esta mas cercano al Sthaphilococcus que en adelante llamaremos Nodriza, las colonias parecen gotas de rocío y si el cultivo lo hacemos en Agar Infusión de Corazón y Cerebro suplementado con Suero y DPN en forma reducida, los cultivos vistos através de una fuente de luz, presentarán un fenómeno de iridiscencia con tonos ligeramente azulados, los cultivos deben presentar además hemoaglutinación positiva, ambas características nos indican cuan antigénica es la cepa aislada.

Existen tres serotipos A,B y C y una bacterina debe de llevar los tres serotipos cultivados por separado y agregados al final.

3.-Con nuestro cultivo,  se hace un pase en embrión de pollo de 5 a 6 días de incubación para este propósito disponemos de una asa de platino que se estira para dejarla como una aguja. El asa se esteriliza a la flama del mechero y se inocula un embrión vía Saco Vitelino, este procedimiento se repite según el número de embriones que requerimos; después de incubar por 24 horas, todos los embriones deben estar muertos y el cosechado se hace en condiciones de esterilidad, recolectando en un matraz de Erlenmeyer. A esto le llamamos Semilla.

4.-La semilla nos permitirá inocular embriones de la misma edad, la cantidad de embriones dependerá del volumen que estimemos.

5,.A las 24 horas de incubación recolectamos los líquidos de los embriones, el cual se inactiva con formaldehido 1.5 ml. por litro de cosechado, se guarda a temperatura de 6 a 7 grados en cuarto frío, normalmente lleva mas de 48 horas para la inactivación, se agitan  los envases para que el formol actúe adecuadamente y se agrega Timerosal como preservativo.

Las pruebas de titulación  inactivación y de potencia se explican en otro apartado

6.-Los cosechados de los tres serotipos se juntan en un envase que contendrá el volumen total de la bacterina..

Una vez que el lote a pasado las pruebas de contol de calidad

 Se procede al envasado, dejando al final una muestra de retención no menor a los 200ml.