Efecto Viricida del Clohidrato de
Amantadina contra el Virus de la
Influenza
Aviar Serotipo H5N2.
Carlos Rodríguez G Laboratorios Biofarma N. L. México
. Octubre
de 2003
Resumen.
Un
aislamiento de Influenza Aviar serotipo H5N2 en granjas de aves de postura
comercial en el Noreste de México, mostró baja patogenicidad, se estudió el efecto viricida del Clorhidrato
de Amantadina para tratar la enfermedad, que en algunos casos sólo se
manifiesta por serología positiva.(5)
El Clorhidrato de Amantadina se ha
usado como antiviral contra la Influenza Aviar
(IA) desde 1966, es efectivo bloqueando infecciones en humanos, en aves y en
mamíferos, esta droga fue usada en
brotes de Influenza en pavos, con relativo éxito, hasta que el tratamiento fue
abandonado cuando se descubrió que la Amantadina podía generar cepas resistentes(3).
En
esta investigación, tratamos de demostrar el efecto viricida de la Amantadina con el
serotipo aislado en el Noreste de México y proponer un tratamiento, de acuerdo
a las ideas de Webster, Kawaoka y
Bean.(5)Tomando como criterio que los
brotes con el serotipo H5N2 aislado han mostrado muy baja patogenicidad y que
algunos se han detectado únicamente por serología positiva pasando
inadvertidos clínicamente
Material
y Métodos
Para
demostrar el efecto viricida del Clorhidrato de Amantadina se usaron embriones
de 10 días de incubación provenientes de aves Leghorn, de una parvada libre de
IA.
Para
comprobar el efecto viricida en aves, se criaron dos lotes de 30 pollitos
Cobbs-Cobbs, lotes bien aislados y separados a los que se les hizo una prueba de Inhibición de la
hemoaglutinación (IH) para demostrar que estaban libres de anticuerpos a IA.
El
suero positivo para las pruebas de IH fué proporcionado por el Laboratorio de la Comisión México-Americana
para la erradicación de la
Fiebre Aftosa y otras enfermedades exóticas (CPA)
La Amantadina se vende en México como Clorhidrato químicamente puro grado USP, pero
ante la imposibilidad de obtener una muestra, se usó Fluviatol de Laboratorios
Boehringer Ingelheim Promeco S.A. de C.V. este antigripal para humanos contiene
50 mg. de Amantadina por tableta.
Procedimiento:
Lote
A. Para demostrar el efecto viricida en embriones de pollo, se preparó un inóculo conteniendo líquido
alantoideo con el virus de IA con un título de 10-7 y Caldo Nutritivo con
Penicilina- Estreptomicina mas 5mg/ml de Amantadina, de esta mezcla se inocularon
10 embriones vía alantoidea, 0.1 ml por embrión.(1)
Lote
B. Lote testigo contenía el virus de IA
con el mismo título y el caldo nutritivo con Penicilina- Estreptomicina, se
inoculó 0.1 ml por embrión.(1)
Ambos
lotes se incubaron durante tres días y se ovoscopearon dos veces por día.
Los
resultados se muestran a continuación:
Tratamiento Embriones Horas de prueba Mortalidad Aglutinación con G.R
Lote
A 10 56 0/10 +0/10
Lote
B 10 56 0/10 +10/10
Nota:
G.R glóbulos rojos de pollo al 5%
Comprobado
el efecto viricida de la
Amantadina, en embriones de pollo, se diseñó una prueba en aves
de engorda Cobbs-Cobbs criados en
completo aislamiento, a las 4 semanas una prueba de IH demostró que estaban
libres de anticuerpos a IA serotipo H5N2.
Tanto
el lote A como el B con el mismo número de pollos, fueron inoculados con una
gota vía ocular con líquido alantoideo que contenía IA con un título de 10-7.
El
lote A, recibió Amantadina 50 mg por litro en el agua de bebida, alimento ¨ad
libitum¨ durante 15 días.
El
lote B, recibió agua y alimento, durante
el mismo período
.
Resultados
El
Lote A, no presentó signos o síntomas de IA, durante todo el período de prueba.
El
lote B, presentó a los tres días, inflamación hemilateral y en algunos
bilateral de los senos nasales, sin secreción mucosa, algunas aves con
estertores traqueobronquiales, depresión y baja en el consumo de alimento,
estos síntomas se observaron durante 5 días, después los pollos se
restablecieron completamente; la prueba se extendió por 15 días.
Resultados No. aves Inflamación de senos nasales Estertores Mortalidad IH(1)
LoteA 30 0/30 0/30 0/30 +0/30
LoteB 30 22/30 16/30 0/30
+30/30
Nota;
IH inhibición de la hemoaglutinaciòn
De
ambos lotes se tomaron 5 muestras al azar de hisopos traqueales a los 10 días
de la prueba, se suspendieron en caldo Nutritivo con Gentamicina 100
microgramos por ml, Penicilina 1000 unidades por ml y Anfotericina B 5
microgramos por ml. Las técnicas estandarizadas para el aislamiento del
virus(1) se efecturaron en 10 embriones de 10 a 11 días de incubación. Cada muestra contenía
el caldo nutritivo con antibióticos mas el exudado de los hisopos del lote
correspondiente, 0.1ml de inóculo por embrión, se incubaron y ovoscopearon dos
veces al día durante el tiempo que duró la prueba..
Resultados: HA
Lote
A +0/10
Lote
B +10/10
El
aislamiento se identificó por una prueba de aglutinación en placa con glóbulos rojos al 5% HA (1)
Discusión
y Conclusiones.
El
Clohidrato de Amantadina demostró ser efectivo contra las IA serotipo H5N2, en
embriones de pollo y en aves de engorda de 4 semanas
Por
otra parte la IA en las granjas donde se hicieron los
aislamientos, mostraron pocos signos clínicos; estertores traquiobronquiales, baja de consumo de alimento, la mortalidad se
incrementó un 1% y en 5 días las aves empezaron a recuperarse. Algunos de
estos síntomas se replican en los
animales inoculados.
La Amantadina según la bibliografía consultada, actúa contra la Neuroaminidasa del
virus (4) y funciona como viricida.
La
Amantadina Clorhidrato es un medicamento soluble en
agua de muy bajo costo comparado con
Oseltamivir y Paramivir de uso en humanos y podría emplearse en casos
donde la cepa de Influenza Aviar es de baja patogenicidad proponiendo la vacunación simultánea con el
mismo serotipo, esto evitaría la difusión del virus que da serología positiva, con
pocos síntomas y pérdidas económicas.
Noviembre de 2013
La aparición, hace un año de una cepa de INFLUENZA
AVIAR de baja patogenicidad H7N7 en una
granja cercana a ULTRECH en HOLANDA tuvo como consecuencia el sacrificio de más
de 32 000 ponedoras y H7 es de reporte obligatorio conforme a las reglas de la OIE.
En este caso se determinó la presencia de INFLUENZA por
pruebas rutinarias, presuntamente signos clínicos y consecuencias comerciales
no se notaron. Entonces cuales casos la
OIE exige que se reporten en muestreo rutinario?
Que tan real es que una cepa de baja patogenicidad mute a
una de alta patogenicidad?, esto seguramene no ocurrió, una cepa de alta
patogenicidad se detectaria con suma facilidad..
Muchas decisiones se toman apresuradamente, es tiempo de
reflexionar al respecto.
Algo muy parecido ocurrió en Nuevo León, con el brote de
baja patogenicidad, fueron cientos de avicultores a los quienes se les sacrificaron
miles de aves en crianza y en producción y también. Hay que decirlo muchos
colegas que no tuvieron ética, porque creo que hace falta enseñarla en la Facultad, se prestaron al
chantaje y a la corrupción.
A consecuencia de eso más de mil fueron los avicultores que pararon y
abandonaron la avicultura, un renglón de la economía de la región, muy
significativo.
En el caso de Nuevo
León se le puede considerar alguna
responsabilidad a la SAGARPA?
BIBLIOGRAFIA
1.- Beard, C.W. Avian
influenza : Isolation and identification of avian pathogens, 2nd ED
S:BB. Hitchner, C:H: Domermuth, H:G: Purchase and J:E: Williams ED. Am Assoc.
OF Avian Pathologist, Colege Station Tex.
66-69, 1980
2.- Beard, C.W. Brugh M and
Webster R:G: Emergence of Amantadina-Resistant H5N2 Avian Influenza Virus
During a Simulated layer Flock Tratment Program. Avian Diseases 31:533-537 1987
3.- Hay, A:J: M: C:
Wainright Patricia O. Purdue L. Michael, Brugh Max and Beard W. Charles.
Amantadina Resistence among Hemagglutinin Subtype 5 Strains OF Avian influenza
Virus. Avian Diseases 35:31-39, 1991.
4.-Hay A.J. Wolstonhome,
J.J. Skehek and M:H: Smith. The Molecular Nasis Of The Specific Antiinfluenza
Action of Amantadina HCL E:M:B.O (Eur.Mol.Biol. Organ J. 4:3021-3024. 1985
5.- Webster, RG Y. Kawaoka,
W.J. Bean, C.W. Beard and M. Brugh. Chemotherapy and Vaccination: A possible
strategy for control of highly virulent Influenza Virus. J. Viol. 55:174-176 1985
.
